汽化过氧化氢灭菌生物指示剂，空间灭菌用生物指示剂怎么用？

空间灭菌高标准洁净环境手段，达到微生物杀灭的可验证效果。汽化过氧化氢（VHP）作为目前应用的空间灭菌技术，良好的穿透性、无残留性和高灭活能力，在制药、生物实验室、食品深加工等领域中逐渐成为方案。具体的判断标准需要通过生物指示剂来显示，汽化过氧化氢灭菌生物指示剂怎么用？怎么看消毒工作有没有到位？

一、生物指示剂的构成和作用

生物指示剂是由对灭菌方式高度耐受的微生物芽孢制备成的标准化检测工具，在 VHP 灭菌中普遍使用的为枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的高浓度干燥孢子载体。芽孢天然高抗氧化能力，能耐受高浓度过氧化氢的氧化应激，在灭菌过程中作为最难被杀死的“挑战对象”存在。指示剂被固定于不锈钢片、塑料圆片、玻璃纤维纸或他惰性材质上，形成一定数量（为 10⁶数量级）的可计数菌落载体，统一布局、后续培养和结果判断。

二、生物指示剂的布点方法和使用细节

在执行汽化过氧化氢灭菌验证任务时，生物指示剂的布点位置、数量和方式对灭菌评估的性决定意义。标准操作应以“最难灭杀区域”为布点。布点需覆盖高空、中层、地面，不可仅局限于操作平面。需考虑复杂结构表面、通风死角、隔断内腔、仪器底部、抽屉缝隙、门轴背面等形成气体薄弱区的位置。对洁净室或设备腔体言，应集中布置，以空间分布均匀、结构多样化为原则进行设置。

生物指示剂在使用前应未受污染，储存于低温干燥避光环境下，孢子提前失活或受潮变质。开启包装后应立即部署，暴露时间过长造成数据偏差。布点时可使用不干胶、灭菌胶带或轻质磁贴将指示剂固定在目标表面，稳定性不干扰灭菌气流循环。布点数量空间体积和验证目的定，小型设备舱体布点不少于 6 个，大型空间可布点 20 个以上。布点记录详细标明位置编号、部署时间、操作者姓名等信息，以便追溯和校准。灭菌周期结束后，应在第一时间收集所有指示剂，并立即转运至微生物实验区进行培养，在现场延迟操作孢子激活或死亡状态发生变化。

三、培养读取和效果判断

收集后的生物指示剂需按照菌种适配的培养条件进行处理，采用 TSA 培养基或专用复苏液进行 24-48 小时恒温培养。常用温度设定为 56°C 或 37°C，具体依孢子类型决定。孢子未被灭杀，在适宜温度和湿度下即可迅速萌发形成菌落或浑浊液体，目视判断是否生长以判定灭菌成效。阳性指示剂表现为菌落增长或液体浑浊，阴性指示剂则应无菌落形成。所有结果应配合阴性对照和阳性对照进行判读，操作过程中无外源污染或技术失误干扰数据。

完整的生物指示剂验证流程仅停留在有无生长的判断，记录培养批次、观察时间、环境条件和操作痕迹，生成完整的灭菌验证报告并归档保存。在药品生产等高监管领域，三批以上重复灭菌并均获得阴性结果后，方可认定该 VHP 灭菌验证。在某批次中出现阳性结果，则需重新布点性、VHP 浓度分布、气流循环效率、灭菌时间设定、空间结构遮挡等因素，明确灭菌失败的实际原因，并对设备参数或空间结构进行整改后再次进行验证。生物指示剂的性不止体现在是否有菌，更在于它能用最简单的方式揭示最深层的灭菌问题。